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新的液相色譜柱應(yīng)該怎么進(jìn)行維護(hù)？

新柱活化，實際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因為分子量高的物質(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢，平衡所需時間也相應(yīng)較長。具體平衡方式也很簡單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。如果要加快平衡時間，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

影響因素：

A:物理因素

1.硅膠純度--填料硅膠的純度與殘留金屬離子濃度

2.色譜柱尺寸--填料床的長度和內(nèi)徑

3.顆粒形狀--球型或不規(guī)則型

4.粒徑--平均顆粒直徑，通常3-10μm

5.表面積--顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和，以m2/gram表示

6.孔徑--顆粒的孔或腔的平均尺寸，范圍80-300Å

B：化學(xué)性質(zhì)

1.鍵合類型--單體鍵合-鍵合相分子與基體單點(diǎn)相連

2.碳覆蓋率--與基體物質(zhì)相連的鍵合相的量

3.封端--鍵合步驟之后，用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來