動態(tài)濁度法鱟試劑是通過檢測反應混合物的濁度到達某一預先設定的吸光度所需要的反應時間，或是檢測濁度增加速度來檢測內(nèi)毒素的方法。在適宜的條件下（溫度，pH值及無干擾物質(zhì)），細菌內(nèi)毒素激活C因子，引起一系列酶促反應，使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應形成凝膠。隨著凝膠的形成，反應液的吸光度(OD值，濁度)增加，OD值增加的速度與內(nèi)毒素濃度成正相關。換言之，OD值上升某一預設限值(啟動OD)所需要的時間(定義為啟動時間)與內(nèi)毒素濃度成負相關，啟動時間的對數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對數(shù)成線性關系，據(jù)此，可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。

　　
 

　　動態(tài)濁度法鱟試劑操作方法如下：

　　

　　1、動態(tài)光度測定儀器的設定：

　　

　　預熱儀器，設置溫育溫度為37℃，設置模板及程序。設定讀板波長為340nm、630nm，設定動力學參數(shù)：讀板90-120分鐘，每讀板間隔30-150s。

　　

　　2、內(nèi)毒素標準溶液配制

　　

　?。?）標準曲線所采用的內(nèi)毒素濃度可以為2至10倍稀釋的系列(如0.5，0.25，0.125，0.0625EU/mL或10，1，0.1，0.01EU/mL))。

　　

　?。?）取內(nèi)毒素工作標準品1支，用砂輪沿安瓿頸部劃痕，開啟，加入適量（建議在0.5mL-1.2mL之間）細菌內(nèi)毒素檢查用水，置旋渦混合器上劇烈振搖5分鐘。

　　

　?。?）將上述內(nèi)毒素溶液進一步用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成所需濃度，每稀釋一步均應在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘。稀釋的內(nèi)毒素溶液靜置時間超過10分鐘，用前在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘，配置時間超過4小時的內(nèi)毒素溶液應丟棄。

　　

　　3、陰性對照為細菌內(nèi)毒素檢查用水。

　　

　　4、動態(tài)濁度法鱟試劑的溶解：按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑*溶解。注意不要用旋渦混合器劇烈振搖。溶解的鱟試劑應在10分鐘內(nèi)使用。若采用多道移液器，將溶解的鱟試劑轉移到除熱原加樣槽，并輕輕搖勻。

　　

　　5、實驗操作：

　　

　?。?）取除熱原微板，在各孔中分別加入100μL細菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標準溶液，或供試品。

　　

　?。?）將微板放置于鱟試儀中，37℃溫育10分鐘。

　　

　　（3）溫育結束，用移液器或多道移液器加入100μL鱟試劑（避免產(chǎn)生氣泡!)，中速振搖10秒混勻，在340nm波長處，每30秒（到60秒）讀一次，讀板120分鐘。