QuantiTect Probe RT-PCR Kit
使用序列特異性探針，進(jìn)行一步法real-time RT-PCR
高特異性檢測(cè)低拷貝的模板
準(zhǔn)確檢測(cè)各種起始量的模板
無(wú)需優(yōu)化反應(yīng)和循環(huán)條件
可使用各種序列特異性探針在各種定量PCR儀上使用
QuantiTect Probe RT-PCR Kit 提供含有 HotStarTaq DNA Polymerase、ROX參比染料和 dNTP混合液的預(yù)混液。為便于使用，預(yù)混液可儲(chǔ)存在2-8°C條件下。dNTP混合液含有dUTP，可進(jìn)行UNG處理。該試劑盒同時(shí)提供經(jīng)優(yōu)化的RT混合液（儲(chǔ)存在-20°C條件下），可高效、靈敏地對(duì)RNA模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，模板量適用范圍廣。
QuantiTect Probe RT-PCR Kit （200） For 200 x 50 ul reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix, 100 ul QuantiTect RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water 204443 ￥6,050.00
QuantiTect Probe RT-PCR Kit （1000） For 1000 x 50 ul reactions: 25 ml 2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix, 0.5 ml QuantiTect RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
原理
Real-time RT-PCR過(guò)程中產(chǎn)生的非特異性產(chǎn)物和引物二聚體會(huì)與特異性產(chǎn)物競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)組分，從而干擾目標(biāo)基因的準(zhǔn)確定量。QuantiTect Probe RT-PCR Kit克服了這些問(wèn)題，通過(guò)使用*的RT-PCR緩沖液促進(jìn)引物、探針和PCR模板之間高特異性退火 （見(jiàn)圖"Specific annealing"）。此外，緩沖液中包含HotStarTaq DNA 聚合酶，相對(duì)其他聚合酶，該酶能提供更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臒釂?dòng)（見(jiàn)圖"Highly specific amplification"）。

操作流程
QuantiTect Probe RT-PCR Kit無(wú)需進(jìn)行繁瑣耗時(shí)的反應(yīng)條件優(yōu)化。只需簡(jiǎn)單地將引物、探針和模板加入到即用型PCR預(yù)混液中，即可在各種定量PCR儀上開(kāi)始反應(yīng) （見(jiàn)流程圖 和表"Components of the QuantiTect Probe RT-PCR Kit"）。

Components of the QuantiTect Probe RT-PCR Kit

組分   特性和優(yōu)點(diǎn)
2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix HotStarTaq DNA Polymerase 經(jīng)改良的QIAGEN Taq DNA 聚合酶，實(shí)現(xiàn)高度嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臒釂?dòng)。
  QuantiTect Probe RT-PCR Buffer *的 RT-PCR 緩沖液，包含優(yōu)化的KCl和（NH4）2SO4組成，促進(jìn)高特異性的引物退火。
  dNTP mix 包括 dUTP, 可部分替代dTTP，兼容在可能有PCR產(chǎn)物交叉污染的情況下使用UNG處理。
  ROX dye 結(jié)合雙鏈DNA后產(chǎn)生強(qiáng)熒光信號(hào)?？啥咳魏文繕?biāo)基因，無(wú)需設(shè)計(jì)序列特異性探針。
QuantiTect RT Mix  Omniscript and Sensiscript Reverse Transcriptases  具有高 RNA親和力的特殊的酶混合物，便于轉(zhuǎn)錄復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)。
2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix   可儲(chǔ)存在2-8℃，無(wú)需反應(yīng)成分解凍，便于更快的進(jìn)行反應(yīng)構(gòu)建。

應(yīng)用
QuantiTect Probe RT-PCR Kit包括HotStarTaq DNA聚合酶和*的RT-PCR 緩沖液，能夠高靈敏度定量低拷貝的RNA靶序列，并且可實(shí)現(xiàn)寬線性范圍的精確定量（見(jiàn)圖 "High sensitivity and efficiency, and wide dynamic range"）。在同一個(gè)管中連續(xù)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和PCR不會(huì)影響靈敏度，通過(guò)與兩步法定量 RT-PCR的 CT 值對(duì)比可證明（見(jiàn)圖 "One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR"）。
Amount of cDNA/RNA Mean CT value
（two-step RT-PCR） Mean CT value
（one-step RT-PCR）
100 ng 24.66 24.66
10 ng 28.15 27.84
1 ng 31.42  31.49
0.1 ng 34.80 34.56
0.01 ng 37.78 37.66
One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR. Tenfold serial dilutions of cDNA or RNA （100 ng to 1 pg） prepared from leukocytes were analyzed in duplicate on the Mx3005 using primers and a FAM-labeled probe specific for IL1R2 （interleukin 1 receptor, type II）.  A  Two-step RT-PCR using the QuantiTect Probe PCR Kit （PCR efficiency: 101%）.  B  One-step RT-PCR using the QuantiTect Probe RT-PCR Kit （PCR efficiency: 104%）.  C  The CT values from the 2 amplification plots.
QuantiTect Probe RT-PCR Kit 可與各種定量PCR儀兼容，包括Applied Biosystems, Bio-Rad/MJ Research, Cepheid, Corbett, Eppendorf, Roche和Stratagene的定量PCR儀。