酶聯(lián)免疫吸附測定（Elisa）概論

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。

酶聯(lián)免疫斑點技術(shù) (enzyme-linked immunospot assay, ELISpot) 是細(xì)胞免疫學(xué)研究中敏感的檢測方法之一，能夠區(qū)分活化的T細(xì)胞亞群，可以在單細(xì)胞水平對抗體分泌細(xì)胞及細(xì)胞因子分泌細(xì)胞進(jìn)行檢測。在疫苗研究中，ELISpot是一種標(biāo)準(zhǔn)工具，用于通過測量激發(fā)強(qiáng)大T細(xì)胞反應(yīng)的能力 (通常是干擾素-γ的分泌) 來確定疫苗的有-效性。為滿足客戶的檢測需求，義翹神州可提供ELISA檢測服務(wù)和ELISpot檢測服務(wù)。

義翹神州提供專業(yè)的ELISA實驗檢測服務(wù)，擁有6000多種優(yōu)質(zhì)ELISA應(yīng)用抗體，500種ELISA檢測試劑盒。

ELISA/ELISpot檢測技術(shù)服務(wù)流程

ELISpot檢測服務(wù)案例

在臨床試驗和候選疫苗中，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）是發(fā)揮細(xì)胞免疫的一類重要細(xì)胞。而 IFN-γ 作為免疫活性細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子在誘導(dǎo)抗病毒免疫中起著重要的免疫調(diào)理作用，因此 IFN-γ 的ELISpot是評價抗原特異性T細(xì)胞免疫的金標(biāo)準(zhǔn)。

ELISpot檢測小鼠T細(xì)胞經(jīng)特異性肽段刺激分泌IFN-γ 的情況。

ELISpot檢測小鼠T細(xì)胞經(jīng)特異性肽段刺激分泌IL-4 的情況。

ELISA/ELISpot檢測相關(guān)內(nèi)容

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）和酶聯(lián)免疫斑點（ELISpot）檢測是兩種基于抗原-抗體反應(yīng)的免疫學(xué)實驗技術(shù)，它們在生物醫(yī)學(xué)研究和診斷中有著廣-泛的應(yīng)用。

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）：

定義：ELISA是一種定性和半定量或定量檢測方法，利用抗原-抗體反應(yīng)的原理，通過酶標(biāo)記的抗體來檢測特定抗原或抗體的存在和量5758。

試驗原理：

抗原或抗體被固定在固相載體（通常是96孔板）上。

加入特異性抗體，這些抗體會與固相載體上的抗原或抗體結(jié)合。

清洗去除未結(jié)合的抗體。

加入酶標(biāo)記的二抗體，它與固相上的抗體結(jié)合。

再次清洗去除未結(jié)合的二抗體。

加入酶的底物，酶催化底物產(chǎn)生可檢測的信號（如顏色變化或熒光）。

通過光度計測定吸光度或熒光強(qiáng)度，從而定量分析目標(biāo)分子的濃度。

Tips：

• 需要特異性的抗體對。

• 可進(jìn)行直接ELISA（抗原固定后直接使用酶標(biāo)記的抗體檢測）或間接ELISA（使用非標(biāo)記的一抗后，再用酶標(biāo)記的二抗檢測）。

• 夾心ELISA可以同時使用兩種特異性抗體夾住抗原。

• 競爭ELISA中，樣本中的抗原與標(biāo)記抗原競爭有限的抗體結(jié)合位點。

• 可用于高通量篩選和定量分析。

• 需要控制實驗條件，如孵育時間和溫度，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

ELISpot（Enzyme-Linked ImmunoSpot Assay）：

定義：ELISpot是一種高靈敏度的細(xì)胞免疫學(xué)檢測技術(shù)，用于檢測單個細(xì)胞分泌特定蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子）的能力5051。

試驗原理：

使用特異性捕獲抗體預(yù)先包被固相載體（通常是PVDF膜的孔板）。

將細(xì)胞與刺激物一起孵育在包被的孔中，細(xì)胞在刺激下分泌特定蛋白質(zhì)。

分泌的蛋白質(zhì)被固相上的捕獲抗體捕獲，形成斑點。

清洗去除未結(jié)合的細(xì)胞和蛋白質(zhì)。

加入生物-素標(biāo)記的檢測抗體，與捕獲的蛋白質(zhì)結(jié)合。

加入鏈霉親和素-酶偶聯(lián)物，與生物-素標(biāo)記的抗體結(jié)合。

加入顯色底物，酶催化底物產(chǎn)生不溶性色素，形成可見斑點。

斑點的數(shù)量和強(qiáng)度與分泌細(xì)胞的數(shù)量和活性成正比。

Tips：

• 可在單細(xì)胞水平上檢測細(xì)胞因子的分泌。

• 高靈敏度和特異性，可以檢測極少量的細(xì)胞因子。

• 斑點的數(shù)量代表分泌特定蛋白質(zhì)的細(xì)胞數(shù)量。

• 可用于評估疫苗效果、細(xì)胞免疫反應(yīng)、自身免疫疾病研究等。

• 實驗操作需要嚴(yán)格控制，包括細(xì)胞培養(yǎng)條件、刺激物的選擇、孵育時間等。

• 需要使用專門的讀板儀和分析軟件來計數(shù)和分析斑點。

這兩種技術(shù)各有特點，ELISA適合于定量分析樣本中的蛋白質(zhì)濃度，而ELISpot更適合于評估細(xì)胞免疫反應(yīng)和檢測單個細(xì)胞的活性。

詳細(xì)信息可查看義翹神州，或者可加微信“sinobio2023”進(jìn)行聯(lián)系。