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牛血清或血漿中巴貝蟲(chóng) IgG 抗體的 IFA 測(cè)試

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病理學(xué)

牛巴貝蟲(chóng)病是一種蜱傳原生動(dòng)物疾病,在歐洲的養(yǎng)牛場(chǎng)中具有相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)意義。該病由牛巴貝蟲(chóng)和雙巴貝蟲(chóng)引起,由 Boophilus spp 的蜱傳播。

巴貝西蟲(chóng)病是紅細(xì)胞的感染。巴貝蟲(chóng)屬包括一組具有三個(gè)生命周期的單細(xì)胞生物,包括蜱蟲(chóng)的有性繁殖、蜱蟲(chóng)唾液腺中傳染性孢子的形成以及脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞中通過(guò)二分叉的無(wú)性繁殖。已經(jīng)描述了一些巴貝蟲(chóng)屬的蜱蟲(chóng)垂直傳播。至于牛巴貝蟲(chóng),對(duì)于 Babesia bigemina,牛的傳播是通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)行的。

檢測(cè)原理

底物載玻片由含有固定紅細(xì)胞的特氟龍掩蔽孔組成,這些紅細(xì)胞被 Babesia bigemina 感染并包含特征性的細(xì)胞質(zhì)裂殖子。

將牛血清用緩沖鹽水稀釋?zhuān)⒃诟鱾€(gè)玻片孔中孵育,以使患者抗體與孔上的巴貝蟲(chóng)抗原發(fā)生反應(yīng)。

然后洗滌載玻片以去除未反應(yīng)的血清蛋白,加入熒光標(biāo)記的 FITC 抗牛 IgG(偶聯(lián)物)。該偶聯(lián)物有時(shí)間與抗原-抗體復(fù)合物反應(yīng)。再次洗滌載玻片以去除未反應(yīng)的偶聯(lián)物。所得反應(yīng)可以使用標(biāo)準(zhǔn)熒光顯微鏡進(jìn)行可視化,其中陽(yáng)性反應(yīng)在每個(gè)孔中被感染的紅細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顯示為清晰定義的蘋(píng)果綠色熒光裂殖子。陰性反應(yīng)表現(xiàn)為紅色復(fù)染細(xì)胞或熒光,這與陽(yáng)性對(duì)照孔中不同。

然后,可以以更高的稀釋度重新測(cè)試陽(yáng)性反應(yīng),以確定最高的反應(yīng)性(終點(diǎn)滴度)

樣品

牛血清或血漿樣品。

收集后,一旦發(fā)生凝固,通過(guò)離心分離血清。然后將血清或血漿轉(zhuǎn)移到無(wú)菌管中,無(wú)菌管可以?xún)?chǔ)存在 + 2-8°C 下。如果超過(guò) 5 天后進(jìn)行檢測(cè),樣品應(yīng)在 -20°C 或更冷溫度下冷凍。從急性受試者身上采集的樣本必須在疾病發(fā)作時(shí)收集;可以每隔 2 周和 4 周采集額外的樣本,以檢測(cè)恢復(fù)期抗體滴度的任何變化。

結(jié)果

結(jié)果可以用帶有 FITC 濾光片的熒光顯微鏡以 400 倍放大倍率讀取。

陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照的熒光模式(形狀、密度等)應(yīng)被視為參考模型。
除對(duì)照中存在的反應(yīng)性模式外,應(yīng)被視為非特異性反應(yīng)(陰性結(jié)果)。

抗巴貝蟲(chóng) bigemina 抗體的存在取決于所分析的地理區(qū)域和人群。

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