MDA-MB-453人乳腺癌細(xì)胞（STR鑒定正確）

產(chǎn)品基本信息

細(xì)胞名稱： MDA-MB-453人乳腺癌細(xì)胞（STR鑒定正確）

種屬來源：人

組織來源：乳房

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長特性：混合生長，貼壁與懸浮細(xì)胞同時存在

培養(yǎng)基:：89% L15基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10% FBS+1%PS

生長條件：氣相：100%空氣(不需要CO2);溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

支原體檢測：無

注意：該細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO?，如沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、收集細(xì)胞培養(yǎng)上清：抽出瓶中的培養(yǎng)基和懸浮的細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清，細(xì)胞重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培養(yǎng)基)。

b、剩下貼壁的細(xì)胞，用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤洗細(xì)胞1次，上清也收集起來。

c、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細(xì)胞消化情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

d、按3mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻吹下細(xì)胞后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

e、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中。(第一次傳代建議一個滿的T25傳一個10cm或者2個T25)。

3)細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心5 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 -5min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的完培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。半貼壁細(xì)胞則根據(jù)前面?zhèn)鞔椒ㄟM(jìn)行處理。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 。

9. 注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。