凱杰生物中國(guó)代理，華東，華北代理Q2674994401

適用于快速一步法RT-PCR，靈敏度高、特異性強(qiáng)、保真性出色

Features

•具有特別的兩階段熱啟動(dòng)特性，確?？稍谑覝貤l件下進(jìn)行反應(yīng)體系構(gòu)建
•專有設(shè)計(jì)的酶混合液可顯著提高反應(yīng)特異性、靈敏度和保真性
•速度更快的1小時(shí)快速熱循環(huán)程序
•內(nèi)置加樣變色指示劑，減少移液錯(cuò)誤
•雙重PCR擴(kuò)增能力，可同時(shí)擴(kuò)增內(nèi)對(duì)照或內(nèi)參

Product Details

QIAGEN One-Step Ahead RT-PCR Kit中含有Sensiscript和Omniscript兩種不同的逆轉(zhuǎn)錄酶，以及平衡配比的Taq DNA聚合酶和具有校對(duì)功能的高保真酶。
熱啟動(dòng)酶使得反應(yīng)體系構(gòu)建得以在室溫條件下進(jìn)行，便利的單管操作和優(yōu)化的反應(yīng)體系確保實(shí)驗(yàn)獲得高靈敏度結(jié)果。帶有顏色的指示劑染料使得實(shí)驗(yàn)人
員能夠分別對(duì)于電泳過(guò)程進(jìn)行監(jiān)控，并減少加樣過(guò)程的失誤。

Performance

QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit可對(duì)任意RNA模板進(jìn)行便利、高靈敏度、特異性的RT-PCR。該試劑盒含有經(jīng)優(yōu)化的組分，使得逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增可在同
一混合液中“一步”完成。特別的酶配比和專門的反應(yīng)緩沖液確保了高效、特異性的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反應(yīng)在同一反應(yīng)管中有序進(jìn)行，無(wú)需額外的優(yōu)化步驟。

在逆轉(zhuǎn)錄步驟，Omniscript和Sensiscript逆轉(zhuǎn)錄酶上結(jié)合有逆轉(zhuǎn)錄阻斷基團(tuán)，使其處于非激活狀態(tài)，不會(huì)在室溫條件下生成非特異的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。當(dāng)溫度升高
至50°C時(shí)，阻斷基團(tuán)從逆轉(zhuǎn)錄酶上解離，逆轉(zhuǎn)錄酶迅速達(dá)到*激活狀態(tài)。
PCR擴(kuò)增步驟受三種經(jīng)平衡配比的DNA聚合酶催化。在室溫下，QuantiNova DNA Polymerase處于抗體介導(dǎo)的阻斷酶活狀態(tài)。它在95oC孵育5分鐘后即可恢復(fù)活性，
在一個(gè)熱循環(huán)即可實(shí)現(xiàn)高度特異性的擴(kuò)增。HotStarTaq DNA Polymerase的酶活性逐漸提高，確保PCR的高產(chǎn)量。具有校對(duì)功能的高保真DNA聚合酶具有3'→5'
外切酶活性，同樣是95oC孵育5分鐘活化，確保擴(kuò)增的高度準(zhǔn)確性和持續(xù)合成能力。預(yù)混液中含有新型雙陽(yáng)離子PCR buffer，確保在寬泛的退火溫度范圍內(nèi)，都
可生成高特異性PCR產(chǎn)物。RT-PCR反應(yīng)還采用了Q-Solution，這一組分有助于對(duì)于富含GC或含有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板進(jìn)行高效的逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增。
室溫下進(jìn)行反應(yīng)體系構(gòu)建這一特點(diǎn)，使該試劑盒可便利的用于自動(dòng)化體系構(gòu)建流程中。PCR預(yù)混液含有反應(yīng)所需緩沖液、dNTP和DNA聚合酶,而含有逆轉(zhuǎn)錄酶和
RNase抑制劑的RT-Mix則單獨(dú)包裝，確保逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)不會(huì)提前進(jìn)行。在進(jìn)行反應(yīng)體系構(gòu)建時(shí)，僅需將引物、模板RNA和RT-Mix加入預(yù)混液中。

該試劑盒中含有加樣指示劑，能有效防止移液錯(cuò)誤的發(fā)生，確保結(jié)果的可靠。顯色體系由預(yù)混液指示劑和模板指示劑兩部分組成，通過(guò)顏色變化即可輕松判斷反
應(yīng)體系中是否加入模板，減少反應(yīng)構(gòu)建時(shí)的失誤。該試劑盒還經(jīng)專門優(yōu)化，可適用于雙重PCR，能夠在單一反應(yīng)體系中同時(shí)擴(kuò)增陽(yáng)性內(nèi)質(zhì)控。試劑盒中含有的RNase
抑制劑能夠防止因RNase污染而導(dǎo)致的RNA降解。

Principle

QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit適用于對(duì)各種RNA模板進(jìn)行靈敏、便利的一步法RT-PCR。酶混合液經(jīng)過(guò)特別配比，適用用于逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增反應(yīng)。Omniscript和
Sensiscript逆轉(zhuǎn)錄酶對(duì)RNA模板具有高親和性，即便對(duì)于低至1 pg的RNA也能進(jìn)行高效、靈敏的逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)結(jié)束后，95°C孵育5分鐘，激活DNA聚合酶，同時(shí)
逆轉(zhuǎn)錄酶失活。這一熱啟動(dòng)步驟能夠避免產(chǎn)生引物二聚體等非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，并且減少背景條帶彌散的發(fā)生，確保高度靈敏性、可重復(fù)的RT-PCR反應(yīng)。

引物退火溫度取決于其堿基組成、引物濃度和離子反應(yīng)環(huán)境。QIAGEN PCR Buffers含有K+和NH4+，確保在寬泛的退火溫度范圍內(nèi)，均可生成特異性PCR產(chǎn)物。在
此條件下非特異性結(jié)合的引物二聚體無(wú)法穩(wěn)定存在，因此可確保反應(yīng)的特異性。由于反應(yīng)對(duì)于溫度條件的要求降低，減少了繁瑣的溫度優(yōu)化過(guò)程。與此相反，在使用
僅含有K+的的PCR或一步法RT-PCR緩沖液時(shí)，理想的PCR退火溫度范圍較小，并且難以預(yù)測(cè)。QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Buffer經(jīng)特別設(shè)計(jì)，能夠用于高效的逆轉(zhuǎn)
錄和PCR擴(kuò)增反應(yīng)。緩沖液中含有的新型添加物組分能夠防止逆轉(zhuǎn)錄酶對(duì)于PCR擴(kuò)增反應(yīng)的抑制，解決了這一在一步法RT-PCR經(jīng)常面臨的問(wèn)題。這一特制的緩沖液確保
引物能夠在寬泛的溫度和Mg2+濃度范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)與模板的特異性結(jié)合，進(jìn)而確保對(duì)各種RNA模板進(jìn)行靈敏、高效的RT-PCR反應(yīng)。

QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit中含有特殊的Q-Solution組分，它能夠?qū)τ诤怂岬娜劢庑袨檫M(jìn)行修飾，促進(jìn)富含GC或二級(jí)結(jié)構(gòu)的困難模板的逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增。QIAGEN
 OneStep RT-PCR Kit含有進(jìn)行RT-PCR的全部所需試劑，適用于即便是最敏感的應(yīng)用。

Procedure

QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit能夠進(jìn)行便利、快速的RT-PCR反應(yīng)，適用于多種應(yīng)用，包括病毒檢測(cè)、分子診斷研究、以及基因表達(dá)分析。只需將逆轉(zhuǎn)錄酶混合液、
引物和模板加入到預(yù)混液中，即可開始熱循環(huán)。反應(yīng)體系構(gòu)建可以在室溫條件下進(jìn)行，可選擇性加入預(yù)混液和模板變色指示劑，以避免在移液過(guò)程中可能發(fā)生的錯(cuò)誤。
反應(yīng)混合液中含有逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增反應(yīng)所需的全部試劑。

Applications

QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit適用于以下RT-PCR應(yīng)用：
 • 病毒檢測(cè)    
• 基因表達(dá)分析