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A005-96T 酶標(biāo)板法 ABTS自由基清除能力測(cè)試試劑盒
- 公司名稱(chēng) 上?;菡\(chéng)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) A005-96T 酶標(biāo)板法
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷(xiāo)商
- 更新時(shí)間 2024/3/11 11:59:40
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糖類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品,脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品,花青素標(biāo)準(zhǔn)品,類(lèi)胡蘿卜素,人乳寡糖等食品分析標(biāo)準(zhǔn)品
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1kit |
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貨號(hào) | A005-96T 酶標(biāo)板法 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
ABTS自由基清除能力測(cè)試試劑盒
(A005-96T 酶標(biāo)板法)
一、 測(cè)定原理
采用ABTS(2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt)評(píng)價(jià)樣品抗氧化能力初由Miller等(1993)提出,現(xiàn)采用的一般是后來(lái)Re等(1999)改進(jìn)后的方法。該方法利用ABTS可被過(guò)硫酸鉀、過(guò)氧化氫、二氧化錳等一系列化合物氧化,生成藍(lán)綠色的ABTS+陽(yáng)離子自由基,在734nm處有大吸收峰。在抗氧化劑的作用下, ABTS+還原成無(wú)色的ABTS。通過(guò)測(cè)定734nm處的吸光值,即可判定反應(yīng)物的抗氧化能力。
二、 試劑組成
試劑一:ABTS試劑300μL × 1支
試劑二:液體試劑300μL × 1支
試劑三:1mM Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液 1ml×1支(乙醇配制)
三、 儲(chǔ)存條件及有效期
試劑盒-20℃可保存6個(gè)月。
四、 試劑的配制
ABTS應(yīng)用液:將試劑二小心全部轉(zhuǎn)入試劑一管內(nèi),旋好管蓋,搖勻,室溫放置12-16h,得到ABTS濃縮液。取10μLABTS濃縮液,采用稀釋液(稀釋液先采用純水20×稀釋?zhuān)┫♂屩?/span>734nm處吸光度為0.65-0.75,記下稀釋倍數(shù)(通常稀釋倍數(shù)為50-200倍,可先從80-100倍區(qū)間內(nèi)開(kāi)始嘗試。)將剩余濃縮液按稀釋倍數(shù)稀釋?zhuān)玫?/span>ABTS應(yīng)用液,避光存放。
Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液:如您需要將樣品的ABTS自由基清除能力表示為Trolox當(dāng)量(TEAC),則需要同步測(cè)定Trolox的ABTS清除能力;如您僅需要將結(jié)果表示為ABTS自由基清除率,則您可以忽略此步驟(可以不需要用到試劑三)。
五、 操作步驟
空白孔 | 測(cè)定孔 | 對(duì)照孔1 | |
ABTS應(yīng)用液(μL) | 200 | 200 | |
樣品溶液(μL) | 20 | 20 | |
稀釋液(μL)2 | 20 | 200 |
充分混勻,室溫避光靜置30min3使之充分反應(yīng)。734nm處采用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值。
1如樣品顏色較淺可不做對(duì)照管(即認(rèn)為對(duì)照為0);
2稀釋液即您配制樣品的溶劑,一般為水、乙醇、PBS等;
2建議反應(yīng)30min,數(shù)值更為準(zhǔn)確,但一般快速測(cè)定時(shí),反應(yīng)10min即可(參考文獻(xiàn):)。
六、計(jì)算公式
1. 簡(jiǎn)單計(jì)算清除率
2. 將清除率表示為Trolox當(dāng)量(Trolox Equivalent Antioxidant Capacity, TEAC)
先根據(jù)計(jì)算方法1求出不同濃度Trolox的ABTS自由基清除能力,并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線(如下圖),再根據(jù)計(jì)算方法1求出樣品的ABTS自由基清除能力,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出TEAC。
注:1 如未做對(duì)照孔,可以將其視作為0;
2 質(zhì)控孔求值時(shí)將其視作測(cè)定孔進(jìn)行計(jì)算即可。
七、注意事項(xiàng)
1. 如樣品中色素物質(zhì)不是分析對(duì)象,建議先進(jìn)行脫色處理,處理后樣品可不做對(duì)照孔;
2. 如不確定樣品的ABTS自由基清除能力,可先做不同濃度的稀釋液進(jìn)行摸索,并選擇適宜濃度進(jìn)行測(cè)定,高濃度下,濃度與清除率間并不線性相關(guān)。Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制建議選取100-1000μM的濃度進(jìn)行分析;
3. 混勻很重要,建議加樣時(shí)反復(fù)吹打,加樣結(jié)束后劇烈振搖酶標(biāo)板30秒以上(液體不能濺出來(lái))。
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