BCA Protein Quantification Kit

BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（增強(qiáng)型）

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法?；陔p縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu²⁺還原成Cu⁺，產(chǎn)生一種紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。BCA蛋白濃度測(cè)定法實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的簡(jiǎn)便、靈敏、快速和穩(wěn)定性。試劑盒中提供的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為用戶制作標(biāo)準(zhǔn)曲線提供了便利。

該BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒可用于比色皿法檢測(cè)，也可用于微孔板法檢測(cè)。前者雖需較大量（100μL）的蛋白樣品，但由于其在檢測(cè)中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20（v/v），從而降低干擾物質(zhì)帶來(lái)的影響。后者操作簡(jiǎn)單方便，僅需少量（10-25μL）的蛋白樣品。不過(guò)，由于其在檢測(cè)中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8（v/v），某種程度上限制干擾物質(zhì)的承受濃度以及降低低檢測(cè)水平。我司提供三種規(guī)格的BCA蛋白濃度檢測(cè)試劑盒，比色皿法分別可做50次，250次，500次。酶標(biāo)法分別可做500次，2500次，以及5000次。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1）靈敏度高，小檢測(cè)蛋白量可達(dá)0.2μg，檢測(cè)濃度下限達(dá)到10μg/mL。

2）速度快，比一般的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒顯色所用時(shí)間短。比傳統(tǒng)的Lowry法檢測(cè)速度約快4倍。

3）線性范圍廣，20-2000μg/mL濃度范圍內(nèi)有較好的線性范圍。

4）不受大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，詳情見附表1。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。試劑盒中的A、B液室溫或4℃保存；蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（BSA）長(zhǎng)時(shí)間不用，可置于-20℃保存，有效期12個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1）使用BCA蛋白測(cè)定法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，因此需注意保持定時(shí)和定溫，以確保精確定量。

2）低溫或長(zhǎng)期保存，若發(fā)現(xiàn)BCA試劑A或者試劑B有沉淀發(fā)生。請(qǐng)37oC溫育并伴隨攪拌促使其充分溶解。如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染，則應(yīng)丟棄，避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。

3）實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，提高上樣量的精確度。

4）每次測(cè)定都需做相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，因?yàn)轱@色反應(yīng)與溫度和時(shí)間的變化有關(guān)，精準(zhǔn)的蛋白定量宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

操作方法

一、配制標(biāo)準(zhǔn)品和工作液

1. 配制BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進(jìn)行稀釋。BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系配制可參考表1和表2。

表1 BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系配制（比色皿檢測(cè)，線性范圍20-2000μg/mL）*

*如用比色皿檢測(cè)，每管需加100μL標(biāo)準(zhǔn)品，按3個(gè)重復(fù)計(jì)算，每個(gè)濃度至少需配制300μL。

表2 BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系配制（微孔板檢測(cè)，線性范圍20-2000μg/mL）*

2. 配制BCA工作液

1）計(jì)算所需要的總BCA工作液體積。

總BCA工作液體積=（標(biāo)準(zhǔn)品+待測(cè)樣品）×重復(fù)數(shù)×每個(gè)樣品所需要的BCA工作液

【注】：比色皿檢測(cè)時(shí)每個(gè)樣品加2.0mL BCA工作液，微孔板檢測(cè)每個(gè)樣品加200μL BCA工作液。

2）配制BCA工作液：50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B（A:B=50:1），充分混勻。

【注】：BCA試劑B加入BCA試劑A中后，迅速渾濁，通過(guò)混勻后立即變澄清。BCA工作液裝入密封容器內(nèi)，室溫條件24h穩(wěn)定。

二、檢測(cè)方法

1. 比色皿檢測(cè)方法（樣品：BCA工作液=1:20）

1）各取100μL標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到反應(yīng)管中。

2）每管加入2.0mL BCA工作液，混勻。37℃孵育30min。

【注】：也可室溫孵育2h，或者60℃孵育30min。BCA檢測(cè)蛋白濃度，延長(zhǎng)孵育時(shí)間會(huì)加深顏色反應(yīng)。升高溫度會(huì)加快顯色反應(yīng)。但是溫度升高和時(shí)間延長(zhǎng)會(huì)降低檢測(cè)下限，以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低，可在較高溫度孵育或者適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

3）冷卻到室溫。分光光度計(jì)檢測(cè)，設(shè)定波長(zhǎng)為562nm。用裝滿水的比色皿對(duì)儀器校零。在10分鐘內(nèi)對(duì)所有樣品讀數(shù)。

【注】：由于BCA反應(yīng)達(dá)不到真正的反應(yīng)終點(diǎn)，即使溫度降低至室溫生色反應(yīng)液會(huì)繼續(xù)。但是，由于室溫下生色比率相當(dāng)?shù)?，因此若?0min內(nèi)能對(duì)所有的樣本進(jìn)行562nm吸光度的測(cè)試，不會(huì)導(dǎo)致明顯錯(cuò)誤。

4）根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度ug/mL；Y-終的OD_562nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。

2. 微孔板檢測(cè)方法（樣品：BCA工作液=1:8）

1）各取25μL標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到微孔板中。

【注】：樣品與工作液比例為1:8，若樣品有限，可使用10μL標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)（即1:20），這時(shí)試劑盒的檢測(cè)范圍為125-2000μg/mL。

2）每孔加入200μl BCA工作液，振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板，37℃孵育30min。

3）冷卻到室溫，在酶標(biāo)儀上的540-595nm波長(zhǎng)范圍處檢測(cè)吸光度，其中562nm波長(zhǎng)為*。

【注】：a）由于酶標(biāo)板的光徑比比色皿短，使得酶標(biāo)板檢測(cè)需要更好的樣品：BCA工作比率來(lái)獲得相同的檢測(cè)靈敏度。若使用高于562nm的檢測(cè)波長(zhǎng)，建議延長(zhǎng)孵育時(shí)間到2h。b）延長(zhǎng)孵育時(shí)間或者提高樣品：BCA工作比會(huì)增高每個(gè)孔的OD_562nm凈值，并且降低檢測(cè)下限和工作線性范圍。

4）根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度ug/mL；Y-終的OD_562nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。

附表：BCA蛋白濃度測(cè)定的兼容性

HB200224